peg-重组酵母尿酸酶结合物的基本特性研究

重组candidautilis尿酸酶由含pet-uricase表达质粒的重组e.colijm109(de3)经乳糖诱导表达，菌体破碎后依次经过硫酸铵沉淀、阴离子交换层析和凝胶过滤层析可以获得纯度95%的重组尿酸酶。还原性sds-page和hplc测得其亚基表观分子量和天然分子量分别约为33kda和130kda。获得的纯酶与20kda(mpeg)2-lys-nhs在特定的条件下反应合成peg-重组酵母尿酸酶结合物,考察了重组酵母尿酸酶peg化前后的基本性质，结果显示peg化尿酸酶的最适ph为7.5，较修饰前下降了1个ph单位，酸碱稳定范围与修饰前类似，都在ph6-10范围内稳定；修饰前后最适温度均为40℃，重组酵母尿酸酶的热稳定性和抗蛋白酶水解能力较peg修饰前有较大提高；peg化尿酸酶可保留修饰前酶活力的87.5%；在最适条件下，peg-尿酸酶结合物的km为3.57×10-5mol/l，而修饰前测得的km为3.91×10-5mol/l。研究结果为深入探讨peg化尿酸酶的结构与功能奠定了基础。