大肠杆菌yggg与结合蛋白era的相互作用研究

era是细菌生长必须的一高度保守的gtpase。yggg是从大肠杆菌全基因组文库中钓取并克隆的era结合蛋白基因，进一步的研究表明该基因在大肠杆菌中的表达与环境应激相关，提示yggg基因产物参与细菌的应激调控。为了阐明yggg蛋白与era蛋白间的相互关系，利用所构建的双启动子表达载体pdh2-yggg-ptac-era在同一细胞中同时表达yggg与era蛋白，并通过免疫共沉淀实验检测细菌裂解产物yggg与era蛋白间的相互作用；在此基础上，构建并表达纯化了gst融合的era蛋白氨基端截短肽和era羧基端截短肽，通过gstpull-down检测了era不同功能区域与yggg蛋白间的相互作用。结果显示，era/yggg复合物仅存在于同时过表达era和yggg蛋白的细菌细胞内，不诱导era或者不诱导yggg蛋白过表达，均检测不到era/yggg复合物存在；纯化的gst不能pull-downyggg蛋白，而纯化的gst融合的era蛋白、era氨基端截短肽及era羧基端截短肽均可以pull-downyggg蛋白；gst融合era氨基端截短肽和gst融合的era蛋白对yggg蛋白结合作用明显高于gst融合的era蛋白羧基端截短肽。上述结果说明，yggg是一大肠杆菌era结合蛋白，yggg与era的氨基端和羧基端的结合活性存在差异。