重组血管活性肠肽的制备及鉴定

为利用基因工程技术获得重组血管活性肠肽(vasoactiveintestinalpeptide,vip)，根据大肠杆菌的密码偏好性，设计并人工合成编码28个氨基酸的vip基因。克隆到表达载体ptwin，构建重组质粒ptwin-vip，转化宿主菌e.colistrainer2566，构建表达工程菌。实现由重组vip，内含肽与纤维素结合域（cellulosebindingdomain,cbd）组成的融合蛋白表达。融合蛋白经几丁质亲和层析纯化，通过改变温度和缓冲液ph值切割融合蛋白，获得目的多肽。所得的多肽经质谱测定分子量结果与理论值相符。生物活性分析表明，重组vip能显著降低急性炎症小鼠血清中抵抗素的水平，发挥抗炎作用。重组vip的制备及其抗炎活性的鉴定为其深入开发奠定了基础。