骨形成蛋白7基因诱导人肝癌细胞的凋亡

目的构建表达重组人骨形成蛋白7（bonemorphogenicprotein7,bmp7）基因的重组逆转录病毒，观察其对人肝癌细胞hepg2的凋亡诱导活性，并探讨其作用机制。方法克隆bmp7基因，以loxp同源重组法构成逆转录病毒载体plp-lncx-bmp7（pllbmp7），转染包装细胞pt67进行病毒包装并测定病毒滴度；将逆转录病毒感染人成骨细胞，mtt法检测细胞生长变化，琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测肿瘤细胞的凋亡；westernblotting检测bmp7，caspase-3和bcl-2蛋白表达。结果重组逆转录病毒载体pllbmp7经鉴定连接正确，转染pt67细胞后上清液中可得到病毒，滴度达1×109pfu；mtt检测见pllbmp7病毒组48和72h细胞抑制率高于对照组（35.1%vs.5.3%，68.5%vs.18.3%，均p<0.05），48h可见bmp7蛋白高表达。琼脂糖凝胶电泳出现典型梯形条带；流式细胞仪检测出现凋亡峰，于转染48h后达最高峰，其凋亡百分率高达14.42%；bmp7蛋白高表达时caspase-3蛋白的表达亦有显著升高，但bcl-2蛋白未见表达差异。结论构建了bmp7逆转录病毒，在体外能够有效地诱导人肝癌细胞hepg2的凋亡，其可能是通过激活caspase-3而发生作用。