相对定量和绝对定量-以cssamdc基因表达分析为例

以无芒隐子草干旱诱导的cdna文库中获得的samdc序列为基础，应用实时荧光定量rt-pcr技术同时结合相对定量和绝对定量方法，以分析无芒隐子草samdc基因在不同组织、不同胁迫梯度下的表达为案例，详细介绍并比较相对定量和绝对定量在基因表达方面的应用。分别采集无芒隐子草幼苗自然干旱0、2、4、6、8、10d以及恢复浇水1、4d的叶片和根系材料，相对定量采用2-△△ct法；以相应基因的质粒扩增产物为标准品制作标准曲线，对定量pcr的引物浓度进行了优化，而后筛选最稳定的内参基因，以内参基因获得的标准化因子对绝对定量数据进行标准化。相对定量2-△△ct法结果显示，cssamdc基因在干旱胁迫8d后，叶片中的表达量为胁迫前的0.62±0.13倍，根中的表达量为胁迫前的5.93±0.71倍。绝对定量表明，cssamdc基因只在胁迫第8d和第10d的根组织中检测到表达量显著增大，胁迫第4～6d和恢复浇水后1～4d，cssamdc基因在叶和根组织中的表达较对照降低。相对定量和绝对定量在cssamdc基因表达研究中显示相对一致的趋势。