不同来源的谷氨酸棒杆菌氨基脱氧分支酸合成酶的活性分析

分别以高产l-丝氨酸的谷氨酸棒杆菌(corynebacteriumglutamicum)syps-062与模式菌株谷氨酸棒杆菌(corynebacteriumglutamicum)atcc13032的基因组dna为模板，运用pcr技术扩增出氨基脱氧分支酸合成酶(adcsynthase)的编码基因pabab。实验结果表明：来源于syps-062和atcc13032的pabab片段全长均为1863bp，编码620个氨基酸。两片段存在16个碱基的差异，引起了7个氨基酸的突变。将pabab连接表达载体pet-28a(+)，构建表达质粒pet-28a-pabab，并转化e.colibl21(de3)，在iptg诱导下，e.colibl21(de3)(pet-28a-pabab)高效表达分子量约为67kda的可溶性蛋白。表达产物带有his-tag标记，选用ni柱对表达产物进行纯化，纯化后酶活测定结果表明，来源于syps-062氨基脱氧分支酸合成酶的比酶活低于atcc13032达46.6%。