人精氨酸酶在毕赤酵母的高效表达、纯化和活性研究

目的：人精氨酸酶（arginase,arg）的基因arg在毕赤酵母高效分泌表达，建立相应纯化工艺路线，研究重组人精氨酸酶的活性。方法：将人精氨酸酶基因arg按正确的阅读框架插入到毕赤酵母表达载体ppic9α信号肽基因后，构建得到重组毕赤酵母表达质粒。转化毕赤酵母gs115筛选高表达菌株。结果：成功构建了酵母表达载体ppic-arg，转化毕赤酵母gs115后筛选到分泌表达目的蛋白arg的菌株，目标蛋白可以分泌到培养基中。经过膜过滤和凝胶过滤层析对培养基上清进行纯化，即可获得纯度达到95%的活性产物。活性测定表明，纯化的arg比活性为310iu/mg。结论：成功构建了arg的毕赤酵母高效表达菌种，建立了目标物质的分离纯化工艺。