prna导入型ribozyme的设计和体外转录制备

目的:枯草杆菌的包装rna分子prna是新型纳米分子载体,将其同锤头型核酶ribozyme重组可以构建结构稳定、能进入细胞、主动识别结合和剪切基因rna的prna-ribozyme。由于目前100nt以上的rna分子采用化学合成制备较为困难,实验采用基因重组构建并体外转录制备170nt的prna-ribozyme。方法:依据prna序列和ribozyme分子序列,采用pcr扩增和克隆重组,将prna-ribozyme按照顺式连接开放式结构、和ribozyme嵌入prna成自身环化闭合型结构,制备其dna质粒;再在体外转录制备prna-ribozyme分子。结果:体外生物合成制备prna-ribozyme顺式连接开放式结构、和ribozyme嵌入prna成自身环化闭合型结构prna-ribozyme分子,它们能通过自身正确折叠形成聚合体结构。体外鉴定prna-ribozyme对其靶mrna均具有切割降解活性,为prna-ribozyme分子的细胞内应用和在胞内表达应用打下基础。