腺病毒载体纤突结的改造及改造后的特性研究

目的:采用一种简便方法在复制缺陷型腺病毒载体纤突结(fibreknob)的hiloop插入精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(arginine-glycine-aspartate,rgd)肽,构建纤突结修饰的腺病毒载体,观察其对rd和t24肿瘤细胞的感染效率以及机体针对外源基因的抗体反应。方法:以pcr方法将rgd插入到padeasy-1后,通过常规方法构建可表达egfp和人呼吸道合胞病毒(humanrespiratorysyncytialviruse,rsv)密码子优化型融合蛋白(fusionprotein,fsyn)的腺病毒载体fgad-rgd-egfp和fgad-rgd-fsyn。用fgad-rgd-egfp感染rd和t24肿瘤细胞,通过荧光显微镜和流式细胞仪检测感染效率,用fgad-rgd-fsyn免疫balb/c小鼠,通过elisa检测针对外源基因的抗体反应。结果:与fgad-egfp相比,fgad-rgd-egfp对rd和t24肿瘤细胞的感染效率都有显著提高,egfp表达效率也明显增强。与fgad-fsyn相比,fgad-rgd-fsyn所引起的机体针对外源基因的抗体反应并无差异。结论:改造后的腺病毒载体能显著提高对rd和t24肿瘤细胞的感染效率,但并不引起机体产生针对外源基因的增强的抗体反应,该载体能用于肿瘤等疾病的基因治疗研究。