利用双抗生素标记提高血管钠肽在毕赤酵母中的分泌表达

依照血管钠肽氨基酸序列,根据毕赤酵母密码子偏爱性,人工合成了血管钠肽的编码基因,通过pcr技术,扩增出5'端含有组氨酸标签的血管钠肽基因片段,构建的分泌型表达质粒ppic9k-vnp,ppiczαb-vnp分别经salⅰ和sacⅰ线性化后,双质粒转化毕赤酵母gs115宿主菌后,g418/zeocin双抗筛选出整合型his+muts表达菌株,tricine-sds-page和westernblot分析,证明his-vnp在毕赤酵母中可有效分泌表达,摇瓶产量可达70mg/l左右,双质粒整合较单质粒整合重组子目的多肽表达量提高了75%。生物学活性研究表明,表达产物在体外具有对巨噬细胞inos和tnfαmrna的抑制作用。