液相杂交快速检测特异dna

检测特异dna片段的方法中,传统southernblot技术由于其高度可重复性及能够显示条带大小的特性,一直是dna检测的"黄金标准"。但是杂交时间长,步骤复杂,放射性污染等问题亟待解决。为了简化southernblot,研究使用了一种液相杂交快速检测dna的方法,即使用异硫氰酸荧光素(fitc)标记的dutp掺入探针后,在溶液中与待检测dna样本42℃下杂交,然后琼脂糖凝胶电泳检测荧光杂交信号。利用质粒为模板,优化了探针制作、杂交液组成、杂交时间和温度等参数。在fitc-dutp:dttp比例为1:3、模板质粒浓度为50μg、1×杂交缓冲液(25mmol/ltris,10mmol/ledta,8mmol/lnacl,ph=8.0)中95℃变性5~9min和42℃杂交3h的实验条件下,可检出1.2μg的质粒,探针灵敏度为7.3ng/μl。这种方法不需要转膜,曝光,大大节约了时间,简化了操作,荧光检测也为该方法同时检测多色样本提供了可能,可广泛应用于核酸检测。