粘质沙雷氏菌pl-06磷脂酶a1基因大肠杆菌优化表达

以粘质沙雷氏菌pl-06基因组为模板扩增得到磷脂酶a1基因plaa和含有辅助蛋白的磷脂酶a1基因plab。plaa和plab基因与pet-28a(+)连接后转入大肠杆菌bl21(de3)表达,得到基因工程菌ap28和bp28。ap28最佳的诱导表达条件为诱导初始od600值0.5,iptg浓度为0.2mmol/l,诱导温度为37℃,诱导时间为4h,优化后磷脂酶a1蛋白表达水平从32%上升至46%,包涵体复性的磷脂酶a1酶活从10.8u/ml上升到12u/ml,相对于bp28工程菌,目的蛋白的表达对宿主细胞毒性小,而且得到的蛋白容易纯化。因此通过优化磷脂酶a1基因plaa的诱导条件,使磷脂酶a1以大量的包涵体形式表达,从而得到较高活性的磷脂酶a1并避免其对宿主细胞的毒性是可行的,而且可以得到大量纯化的磷脂酶a1蛋白,方便下一步的研究。