麻疯树核糖体失活蛋白curcin2的原核可溶性表达及其抗真菌活性研究

curcin2是麻疯树幼苗在真菌侵染、干旱及高低温胁迫下诱导产生的一种核糖体失活蛋白。采用分子克隆的方法,从麻疯树基因组中扩增到curcin2成熟肽编码基因,分别连接到质粒载体pgex-6p-1、pmal-c5e上,转化大肠杆菌最终获得重组菌pgc(pgex-6p-1-curcin2)和pmc(pmal-c5e-curcin2)。在不同温度、iptg浓度、时间诱导下,curcin2在重组菌pgc中均以包涵体形式表达,在重组菌pmc中主要以可溶性融合蛋白形式表达,且蛋白质的表达量与诱导条件相关。重组菌pmc表达可溶性curcin2的优化条件为:温度28℃,iptg0.3mmol/l,时间8h,此条件下目的蛋白占总蛋白表达量的30.6%,1l培养物中可获得19.74mg电泳纯的重组蛋白。重组蛋白可被mbptraptmhp柱亲和纯化并与curcin抗体发生抗原抗体反应。体外抗真菌活性实验表明,纯化后的curcin2融合蛋白有抑制真菌生长作用,且对小麦赤霉、油菜菌核的抑制作用强于curcin。此蛋白的获得为其相关功能的研究奠定了基础。