集成干扰素突变体iifn/165s的构建及其生物学评价

目的:通过定点突变,构建集成干扰素(iifn/165s),以期获得高效的新型药物分子。方法:采用pcr体外定点突变技术,使集成干扰素iifn基因的第165位密码子由cgt突变为agt。扩增片段克隆入pet-23b表达载体,重组质粒转化大肠杆菌bl21(de3)。在lb培养基中培养,经iptg诱导表达的iifn/165s经包涵体变性、复性以及层析纯化后,经sds-page、westernblot和maldi-tof-ms分析,用wish-vsv系统进行抗病毒活性测定同时应用流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:iifn/165s以包涵体形式表达。纯化后,iifn/165s的纯度大于95%,分子量为18172,比活性(7.63±0.22)×108iu/mg,诱导细胞凋亡率呈剂量依赖。结论:构建了iifn/165s的表达载体,并成功地在大肠杆菌中表达,获得了高纯度高活性突变分子iifn/165s。