高表达snail蛋白诱导黑色素瘤emt细胞模型的构建及鉴定

目的:构建稳定表达snail蛋白的可用于肿瘤上皮-间质化研究的肿瘤细胞模型。方法:采用亚克隆方法从质粒pcmv6-msnail中pcr扩增小鼠snail基因,连接至表达质粒pl-tdtomato-neo,筛选重组质粒并经双酶切及测序鉴定。构建成功的重组质粒pl-tdtomato-msnail转染小鼠黑色素瘤b16细胞,g418筛选稳定细胞株。采用荧光定量pcr和westernblot技术检测胞内snail及上皮/间质标志物的变化。建立裸小鼠皮下移植瘤模型,活体成像系统观测移植瘤。结果:重组质粒pl-tdtomato-msnail成功构建,其稳定转染株b16/dt-msn胞体发出强烈红色荧光。胞内snaill水平显著上调,e-钙粘蛋白下调,波形蛋白表达上调,呈现典型的上皮-间质化表型。结论:成功获得稳定高表达小鼠snail蛋白的emt细胞模型,且可用于体内外荧光成像观测,为研究snail蛋白在介导肿瘤emt过程中的生物作用提供了重要的实验工具。