重组人谷氨酸脱羧酶65的表达及活性研究

目的：获得有活性的人谷氨酸脱羧酶65（humanglutamatedecarboxylase65，hgad65）用于ⅰ型糖尿病（type1diabetesmellitus，t1dm）检测。方法：将hgad65基因插入质粒pet32a(+)中，与硫氧还蛋白（thioredox）及六聚组氨酸（hexahistidine）融合，由iptg诱导融合蛋白（trx-hgad65）表达，经两次镍离子亲和层析纯化，通过薄层层析和elisa研究hgad65及trx-hgad65的活性。结果：在大肠杆菌中实现hgad65的可溶性表达，经亲和层析得到较纯hgad65和trx-hgad65蛋白，二者具有相同酶学活性，但trx-hgad65稳定性更高，并能检测出t1dm患者血清中的hgad65抗体（hgad65-ab）。结论：trx-hgad65能在大肠杆菌中可溶性表达，从而为trx-hgad65用于t1dm诊断、预防和治疗打下基础。