重组c8orf32蛋白的表达、纯化及抗体制备

c8orf32是一种功能未知基因，其mrna含量在乳腺癌组织中显著高于正常乳腺组织。将其开放式阅读框插入pgex-6p1原核表达载体t7启动子控制下的gst编码基因下游，构建了c8orf32蛋白表达质粒pgex-6p-c8。表达质粒转化入大肠杆菌bl21(de3)菌株，经iptg诱导，成功表达了gst-c8orf32融合蛋白。经带有gst标签的位点特异性蛋白酶切割除去gst-c8orf32融合蛋白的gst标签，获得了n端带有8个多余氨基酸残基的c8orf32蛋白，蛋白纯度为95%左右。n端氨基酸序列分析表明该蛋白n端氨基酸序列正确，质谱鉴定进一步证明所表达c8orf32蛋白的正确性。用制备的c8orf32蛋白免疫新西兰白兔，获得了能够正确识别c8orf32蛋白的抗血清。该蛋白及其抗体的成功制备，为进一步研究c8orf32蛋白的结构功能和体内分布打下了基础。