抗ige单链抗体在大肠杆菌中可溶性高效表达条件的研究

目的:以抗ige单链抗体(anti-igescfv)为研究对象,以大肠杆菌周质高效表达可溶性单链抗体为目标,研究不同宿主细胞、培养基及培养条件对可溶性单链抗体表达产量的影响。方法:构建rosetta(de3)、bl21(de3)和solubl21(de3)三种大肠杆菌工程菌,研究不同碳源、氮源、培养基配方和培养条件对可溶性抗ige单链抗体产量的影响。结果:携带抗ige单链抗体基因的pet-ige26质粒在新型宿主solubl21(de3)中的表达产量明显优于传统的rosetta(de3)和bl21(de3)宿主菌。经碳氮源筛选、培养基和培养条件的优化,确定solubl21(de3)工程菌高效表达可溶性重组抗体的最佳培养基为:以m9培养基为基础,添加0.5%葡萄糖、0.6%酪蛋白胨和0.02%微量元素。最佳的培养条件为:以lb为种子培养基,37℃过夜培养至od600为3.0左右,以5%接种量接种于最佳发酵培养基中;接种后细胞生长条件:37℃,260r/min,培养3.5h;细胞诱导培养条件:当od600为1.5～1.8时,降温至25℃,添加0.1mmol/liptg,220r/min继续培养16h。经抗原elisa检测,抗ige单链抗体的可溶性表达量比原始对照组提高了5倍。结论:通过对宿主细胞类型的筛选、培养基及培养条件的优化,可以显著提高重组单链抗体在大肠杆菌周质空间内的表达产量。该研究结果不仅为规模化制备抗ige单链抗体提供了技术支持,同时为大肠杆菌生产重组小分子抗体提供了有价值的参考。