布鲁氏菌b.ovisvirb缺失株的构建及胞内环境适应性分析

目的:利用基于t载体快速克隆构建布鲁氏菌突变株的方法,构建缺失virb启动子区域的绵羊附睾布鲁氏菌株,为绵羊附睾种布鲁氏菌iv型分泌系统功能研究奠定基础。方法:运用同源重组的原理,用kana抗性基因替换编码分泌系统virb的启动子区域,从而获得virb的突变株。通过rt-pcr对突变株virb基因的转录进行了分析;分析突变株和野生株在体外模拟的胞内环境下的生存能力,观察virb对b.ovis胞内生存环境适应的影响。结果:成功构建了b.ovis的缺失virb启动子区的突变株,突变株中virb基因的表达抑制。与野生株相比,突变株对胞内环境的适应力发生了改变。结论:利用t载体克隆和抗性替换的方法成功构建了b.ovis的virb的突变株,为b.ovis的iv型分泌系统的功能研究奠定了基础。