产肠毒性大肠杆菌dpo-pcr检测方法的建立与应用

双启动寡核苷酸引物（dual-primingoligonucleotide，dpo）是一种新型的引物设计方法，具有设计简易、特异性强以及退火温度范围宽的特点。以产肠毒性大肠杆菌lt基因为靶基因，设计了一对dpo引物，经过对taqdna聚合酶、mg2+、dntp反应体系因子的优化，建立了产肠毒性大肠杆菌dpo-pcr检测方法，测定了该方法的灵敏度、特异性以及退火温度不敏感性。结果显示，该方法检测灵敏度为1.24×102cfu/ml，在45℃~65℃退火温度范围内，均可实现靶基因的高效扩增。该方法特异性强，测试菌株中4株产肠毒性大肠杆菌均为阳性结果，其余菌株为阴性结果，且无非特异性扩增发生。与常规pcr方法相比，dpo-pcr方法不需要对引物参数特别是退火温度反复优化，同时dpo引物的特殊结构又增强了检测特异性，为致病性微生物的快速准确检测提供了新方法。