单纯疱疹病毒2型潜伏相关转录本开放读码框的表达及其抗凋亡功能分析

目的:研究单纯疱疹病毒2型潜伏相关转录体(lat)开放读码框(orf)对凋亡诱导剂诱导vero细胞凋亡的影响。方法:pcr扩增latorf1、orf2、orf3片段,构建重组质粒pegfp-orf1、pegfp-orf2、pegfp-orf3,重组质粒pegfp-orf1、pegfp-orf2、pegfp-orf3转染vero细胞;rt-pcr鉴定orf1、orf2、orf3的表达。用凋亡诱导剂放线菌素d、顺铂、5-氟尿嘧啶(5-fu)诱导vero细胞凋亡,通过荧光显微镜观察细胞形态学的改变,mtt检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:双酶切和测序确认pegfp-orf1、pegfp-orf2、pegfp-orf3构建成功,rt-pcr表明这３个真核表达载体能在vero细胞中高效表达。转染各种pegfp-orf的vero细胞经凋亡诱导剂诱导后,细胞形态正常。mtt结果表明转染了各种重组质粒pegfp-orf的vero细胞经凋亡诱导剂诱导后vero细胞活性与未经任何处理的正常对照组相比,差异无统计学意义(p>0.05),但高于凋亡诱导剂诱导凋亡的vero细胞组及与转染空质粒pegfp-c2,且经凋亡诱导剂诱导的vero细胞组,差异具有统计学意义(p<0.05)。流式细胞术结果表明,转染各种重组质粒pegfp-orf且经凋亡诱导剂诱导凋亡组与正常对照组凋亡率差异无统计学意义(p>0.05),而显著低于转染空质粒pegfp-c2且经凋亡诱导剂诱导凋亡组,差异有统计学意义(p<0.05)。结论hsv-2latorf对凋亡诱导剂诱导的vero细胞的凋亡具有抵抗作用。