展示kdr胞外区vegf结合域的t4噬菌体对肺癌细胞增殖侵袭的抑制作用

目的:构建展示kdr的t4噬菌体并在细胞水平上检测其抑制肿瘤细胞增殖侵袭的作用及机制。方法:利用soe-pcr的方法将kdr膜外区d2和d3与t4噬菌体小衣壳蛋白soc基因融合并克隆到pet28b表达载体中,经iptg诱导表达并纯化后,利用体外展示技术将重组kdr-soc蛋白展示在t4噬菌体表面,得到t4-kdr噬菌体。mtt法检测t4-kdr噬菌体对肺癌a549细胞的增殖抑制作用,并采用transwell法检测其对vegf促侵袭作用的影响。rt-pcr法检测t4-kdr对mmp-2和mmp-9mrna水平的影响,并通过westernblot方法检测其对vegf诱导erk1/2磷酸化及其下游cyclind1,p27,bcl-2和bax表达水平的影响。结果:kdr-soc在大肠杆菌中稳定表达,展示kdr的t4-kdr噬菌体具有结合vegf-165的能力,并显著抑制肿瘤细胞增殖和侵袭活性,降低mmp-2和mmp-9基因mrna水平。westernblot结果表明t4-kdr噬菌体抑制vegf诱导erk1/2的磷酸化,降低cyclind1及bcl-2表达的同时,提高p27和bax的表达。结论:展示kdr的t4噬菌体具有抑制肺癌细胞增殖和侵袭作用,其对mek/erk信号通路及其下游调控因子的影响是其作用的重要分子机制。