t26p和a30p位点突变对thermobifidafusca葡萄糖异构酶热稳定性及活性的影响

通过定点突变技术构建了嗜热菌thermobifidafusca葡萄糖异构酶(tfgi)的3个突变体:tfgi/t26p,tfgi/a30p和tfgi/t26p/a30p。结果表明突变体tfgi/a30p的热稳定性得到提高,70℃下半衰期从14.9h提高到22.3h,且最适温度不变,最适温度下的比酶活保持不变。而突变体tfgi/t26p和tfgi/t26p/a30p在70℃下半衰期都降到8.1h,最适温度和最适温度下的比酶活也都显著降低。tfgi及其单突变体的三维结构模型叠加分析结果表明:突变体a30p没有产生其它分子间作用力,tfgi的"phe27环"的基本结构没有改变,因脯氨酸残基降低了蛋白解折叠的熵值,所以其热稳定性提高而比活力不变。