重组蛋白nta-pacap在大肠杆菌中的表达纯化及活性测定

目的:通过构建pacap38与agrin的n端结构域(nta)相连的重组基因的原核表达载体,获得重组nta-pacap蛋白,并验证其生物学活性,为未来的规模化制备奠定基础。方法:将pacap38与层粘连蛋白的受体蛋白agrin的n端通过连接肽相连,合成重组蛋白的基因片段,并在此基因片段末端连上6个组氨酸标签密码子,然后将此重组基因片段克隆至大肠杆菌表达载体pet-3c中,转化e.colibl21(de3),获得重组工程菌并摸索发酵和纯化条件,iptg诱导表达后收集菌体破碎离心,收集上清液,经阴离子交换层析和ni-nta树脂亲和层析两步纯化法获得目的蛋白;通过pc12细胞饥饿损伤后修复实验模型来检测nta-pacap38的生物学活性。结果:成功表达并获得纯度90%以上的nta-pacap38蛋白,生物学活性实验证明nta-pacap38具有促饥饿损伤后的pc12细胞增殖能力。结论:获得的重组蛋白nta-pacap38具有生物学活性,表达系统和纯化工艺可以用于下一步的规模化制备。