大肠杆菌表达诺如病毒p粒子生物活性及其超微形态

诺如病毒(norovirus,nvs)是非细菌性急性胃肠炎的主要病原,严重地威胁着婴幼儿、老年人和公共场所人群的健康。疫苗是目前临床预防由nvs引发急性胃肠炎的主要策略之一。按番茄偏爱密码子设计合成编码诺如病毒(va387)衣壳蛋白——p粒子基因pgene(1002bp),为便于纯化,pgene的5＇端包含编码6×his-tag的dna序列;构建原核表达载体pet32a-pgene并导入bl21。在16℃条件下,用终浓度1mmol/l的iptg(isopropylβ-d-1-thiogalactopyranoside)诱导表达,ni-nta树脂亲和层析法纯化获得p粒子,并通过westernblot加以确认;在透射电子显微镜(transmissionelectronmicroscopy,tem)下观察到了球形p粒子成功组装;用该蛋白免疫小鼠,成功获得了活性的抗体血清。为后续用番茄研制口服诺如病毒疫苗奠定了基础。