还原型谷胱甘肽对人脐带间充质干细胞成软骨诱导的影响

目的:探讨还原型谷胱甘肽(reducedglutathione,gsh)对人脐带间充质干细胞(humanumbilicalcordmesenchymalstemcells,huc-mscs)的成软骨诱导是否有促进作用。方法:分离培养人脐带间充质干细胞并鉴定其特异性。在生长因子(tansforminggrowthfactorbeta1,tgf-β1)存在的条件下,用500μmol/lgsh诱导huc-mscs向软骨样细胞分化。倒置相差显微镜观察诱导前后细胞的形态变化;甲苯胺蓝染色及免疫荧光反应分别检测ⅱ型胶原(col2a1)、葡萄糖胺聚糖(gag)(蛋白水平定性);阿利新蓝法及羟脯氨酸法分别检测col2a1、gag含量(蛋白水平定量);qpcr在分子水平检测col2a1、gagmrna表达,观察诱导前后细胞的基质分泌情况。结果:gsh连续诱导培养21d后,基本诱导培养基组(b组)、基本诱导培养基+0.5%二甲基亚砜(dimethylsulfoxide,dmso)组(bd组)及基本诱导培养基+0.5%dmso+500μmol/lgsh组(bdg组)细胞甲苯胺蓝染色及免疫荧光反应均呈阳性;bdg组gag和col2a1含量及mrna表达量均要高于b组、bd组,具有显著的统计学差异(p＜0.05)。结论:gsh可促进huc-mscs向软骨样细胞诱导分化。