嗜热真菌木聚糖酶1yna及其双硫键突变体在毕赤酵母中的表达

将前期已经获得的大肠杆菌表达的木聚糖酶1yna的野生型(bl1)及定点突变后的双硫键型(c24)基因,分别克隆到表达载体ppic9中,获得的重组质粒转入毕赤酵母gs115中,构建成功毕赤酵母工程菌并表达获得木聚糖酶野生型(tlx)及木聚糖酶双硫键型(dsb)。在对表达量和酶特性进行分析后的结果证实,2株重组毕赤酵母均能高效表达,在摇床培养水平上,野生型与突变型均表达出具有高活力的酶蛋白,表达量分别为1.75mg/ml(tlx)与1.82mg/ml(dsb),且在培养液中目标产物外的杂蛋白含量非常少。dsb显示出的热稳定性明显高于tlx。dsb的最适反应温度为75℃,tlx的最适反应温度为68℃。dsb在75℃下处理30min分钟后仍能保留50%的残余酶活力,同等处理条件下tlx的残余酶活力则低于20%。本项实验是首次报道利用毕赤酵母表达木聚糖酶1yna及其突变体。