wnt/β-catenin信号通路在大鼠bmscs神经分化中的作用研究

目的:研究wnt/β-catenin信号通路在大鼠bmscs神经分化中的作用,探讨应用egf、bfgf诱导bmscs神经分化的可能信号分子机制。方法采用全骨髓贴壁法体外分离纯化大鼠bmscs。第3代bmscs分别给予20ng/ml碱性成纤维生长因子(bfgf)和(或)20ng/ml表皮生长因子(egf)在含10ml/l(1%)胎牛血清(fbs)的dmdm/f-12培养基中诱导,倒置相差显微镜观察其形态变化,免疫组织化学法检测细胞内神经元特异性烯醇化酶(nse)及胶质纤维酸性蛋白(gfap)的表达,rt-pcr检测其β-catenin、bdnf、gdnf、nestin基因mrna的变化。结果诱导7d后bfgf和egf+bfgf组细胞变圆,向四周伸出多个明显突起,部分突起间存在连接,而egf组、空白组变化不明显;免疫组化染色示egf组gfap阳性率高于nse,而bfgf和egf+bfgf组nse阳性率高于gfap。egf+bfgf组nse、gfap阳性率最高,bfgf组次之,与空白组、egf组比较差异均有统计学意义(p<0.0042);rt-pcr示nestin在bfgf和egf+bfgf组较其他组显著增高,差异均有统计学意义(p<0.05);β-catenin、bdnf在egf组、bfgf组、egf+bfgf组显著高于空白组,且各组间比较差异均有统计学意义(p<0.05);gdnf在bfgf组、egf+bfgf组显著高于其他组,且bfgf组高于egf+bfgf组,差异均有统计学意义(p<0.05)。结论bfgf、egf可诱导大鼠bmscs向神经细胞分化,分化过程中β-catenin、bdnf、gdnf基因表达增高,wnt/β-catenin信号通路可能在bmscs向神经分化过程中起重要作用。