e.colirecq解旋酶克隆表达纯化及生物学活性检测

recq解旋酶是生物分子代谢过程中重要的大分子物质,对保持遗传物质的稳定性具有重要作用。通过pcr从e.colidh5α菌株的基因组中扩增出e.colirecq基因并克隆入原核表达载体pet24a(+)中,转化大肠杆菌e.colibl21(de3),iptg诱导表达,目的蛋白主要以可溶形式存在于菌体中。优化表达条件后,经镍柱螯合亲和层析纯化获得纯度大于90%的目标蛋白质,应用生物化学和生物物理学技术研究e.colirecq解旋酶的生物学活性。结果表明,e.colirecq解旋酶具有dna依赖性和蛋白浓度依赖性的atp水解活性。在等蛋白质浓度下,e.colirecq酶结合dna活性强弱依次为开叉dsdna,ssdna,平末端dsdna。其还具有atp依赖的dsdna解链活性和时间依赖的dna退火活性。实验为recq解旋酶家族其他重要成员的活性功能研究提供了理论依据和重要参考。