基于fmdvires的双顺反子载体的构建及体外表达分析

利用rt-pcr扩增出口蹄疫病毒小核糖体进入位点（ires）序列，并定向克隆进pcdna3.1(+)载体，构建成双顺反子真核表达载体。为了验证该载体是否能够转录出双顺反子mrna，在ires起始密码（atg）下游正确插入增强型的绿色荧光蛋白基因（egfp），把重组质粒转染bhk-21细胞，培养20～48h，在紫外显微镜下观察，能够看到典型的绿色荧光，表明载体能够体能够利用fmdv的ires能够介导非帽依赖性表达外源基因。并通过流式细胞仪，与同样是cmv启动转录egfp的pgfpn1质粒在细胞中的表达的水平进行了比较。该载体的成功构建为体外表达双基因、双顺反子逆转录载体构建以及相关应用奠定基础，并有作为基因疫苗和标记定位基因治疗载体的潜力。