中介蝮蛇毒纤溶酶基因真核表达载体的构建及其功能的研究

目的:蛇毒纤维蛋白溶解酶能直接溶解纤维蛋白或纤维蛋白原,在心脑血管疾病的治疗方面具有潜在的应用价值。方法:采用双酶切技术从pmd18t-flei克隆载体上获得中介蝮蛇毒纤溶酶基因编码区,再将其亚克隆到真核表达载体pfastbachta上,经转化、筛选和鉴定,获得重组真核表达质粒pfastbachta-fle。重组质粒经小鼠尾静脉快速注入小鼠体内,进行瞬时表达。结果:经sds-page和westernblot检测,表明在小鼠肝脏组织中有重组fle蛋白表达。免疫组织化学检测证明该蛋白在小鼠肝脏组织中大量表达。纤维蛋白平板法鉴定该重组蛋白具有较高的纤溶活性,其活性呈现出剂量相关性和时间依赖性。因此为进一步对中介蝮蛇毒纤溶酶的应用奠定了坚实的基础。