5’非翻译区序列改建提高抗菌肽pr39表达

目的：在毕赤酵母smd1168中高效表达抗菌肽pr39，并检测其抗菌活性。方法：根据毕赤酵母密码子偏爱性，人工合成4条寡核苷酸片段，通过重叠pcr获得pr39核苷酸序列，将其插入酵母表达载体ppic9k，重组表达质粒ppic9k-pr39经pcr敲除pr395’端多余的长度为24bp的核苷酸序列得到ppic9k-pr39-d，再经pcr、酶切连接构建5’utr已删除8个核苷酸ggatccaa的新型毕赤酵母表达载体ppic9k-pr39-d-e；ppic9k-pr39-d-e转化到毕赤酵母smd1168，经pcr鉴定及g418筛选，用0.5%的甲醇诱导表达，tricine-sds-page分析，再利用琼脂糖扩散法测定发酵上清的抗菌活性，表达产物经反相层析及sp-sepharose层析柱纯化测定其表达量。结果：经tricine-sds-page检测，在4.7kda左右处可见目的蛋白表达条带，纯化后测定蛋白浓度表达量约为175.6mg/l。获得的抗菌肽pr39对e.colidh5α，有明显抑菌活性。结论：经改建后新型毕赤酵母表达载体ppic9k-pr39-d-e在毕赤酵母中可高效表达抗菌肽pr39，为以后深入研究毕赤酵母高效表达抗菌肽奠定了基础。