利用n-糖基化修饰对β-甘露聚糖酶man47的稳定性改造

n-糖基化是真核生物蛋白质最重要的翻译后修饰之一。以armillariellatabescensβ-甘露聚糖酶man47为研究对象，利用计算化学对a.tabescensβ-甘露聚糖酶man47进行理性设计，经过分子对接、二级结构分析和糖基化的可行性分析后，构建具有eas（enhancedaromaticsequence）序列的突变体g-123作为n-糖基化的突变位点。将其整合到毕赤酵母表达载体smd1168上，通过电转化得到重组转化子。最后对突变体g-123的温度稳定性、酸碱稳定性、胃蛋白酶和胰蛋白酶抗性进行分析。结果表明：糖基化a.tabescensβ-甘露聚糖酶man47突变体g-123与野生型相比，其热稳定性、酸碱稳定性、蛋白酶抗性均得到不同程度的改善。