靶向mirna干扰bmi-1诱导胆囊癌细胞凋亡及上调caspase-3表达的研究

目的：通过靶向抑制原癌基因bmi-1表达，观察其诱导胆囊癌细胞凋亡及上调caspase-3蛋白表达的效应，探讨其在胆囊癌形成中的机制。方法：通过前期成功构建mirna-bmi-1重组质粒转染gbc-sd细胞，然后将其分为mirnabmi-1、mirnascramble、lipofectamine、gbc-sd4组，转染48h后采用rt-pcr和westernblot法检测各组bmi-1mrna和蛋白的表达,倒置显微镜观察细胞生长情况;流式细胞技术检测细胞的凋亡率、细胞周期分布及caspase-3蛋白表达水平。结果：rt-pcr和westernblot结果显示mirnabmi-1组细胞bmi-1mrna和蛋白的表达水平明显低于对照组（p<0.05）。倒置显微镜观察显示mirnabmi-1组细胞死亡较对照组明显；细胞周期检测显示：mirnabmi-1组细胞阻滞于g0/g1（72.20±1.71），g2/m和s期细胞减少（18.30±7.21，9.50±6.01），凋亡指数增高（49.83±5.19），caspase-3蛋白表达量明显增加（30.37±8.10），与对照组比较，具有显著性差异（p<0.05）。结论：靶向沉默bmi-1能有效抑制胆囊癌细胞bmi-1mrna及蛋白表达，诱导胆囊癌细胞凋亡，其机制可能是早期使胆囊癌细胞周期阻滞于g0/g1期，并上调了caspase-3蛋白表达，bmi-1可能参与调控线粒体依赖的凋亡途径。