gshf在大肠杆菌中的表达及酶学性质研究

谷胱甘肽是参与细胞活动的最普遍的非蛋白巯基化合物，是机体内重要的活性三肽，因其抗氧化作用而在医药、食品、化妆品等行业有着广泛的应用，生物合成是制备谷胱甘肽的主要方法，一直引起广泛关注。近年来发现的双功能酶gshf可同时催化谷胱甘肽生物合成的两步反应，有望提高酶法催化产谷胱甘肽的效率，但该酶的酶学性质尚未得到充分研究。克隆了来自streptococcusthermophilus的双功能酶基因gshf，并用大肠杆菌表达，研究表明，重组菌于37℃培养4h后经0.1mmol/liptg诱导，然后在30℃下表达，胞内酶活可达44u/l。表达产物经破胞、离心、亲和层析等步骤分离纯化后，进一步考察了其相关酶学性质，结果表明，该酶最适ph为8.0，最适温度为37℃，还研究了其最适ph和温度下的稳定性。最终通过重组菌酶法催化合成谷胱甘肽得到的最高产量为2.11g/l。这些对该酶在谷胱甘肽生物合成上的应用有重要的借鉴作用。