利用red系统快速改构含鼠β-酪蛋白基因的细菌人工染色体

采用red系统介导的同源重组方法对含有鼠β-酪蛋白基因的rpci23-440c1bac进行快速改构。首先通过pcr方法,获得两端带有鼠β-酪蛋白基因同源序列的tpam-zeo同源重组片段,然后将此同源重组片段电击转化至已含有编码red重组酶质粒的rpci23-440c1bac菌中,在λred重组系统的帮助下,通过同源重组片段两端与rpci23-440c1中β-酪蛋白同源的序列在菌体内与β-酪蛋白基因发生同源重组,将其置换。最后利用zeocin抗性基因两侧的frt位点,通过flp位点专一性重组将抗性基因剔除。经southernblot和序列分析鉴定表明,获得了重组正确且无编码两种重组酶质粒的tpam-rpci23-440c1bac克隆。