小鼠canstatinc端片段基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

为了构建小鼠canstatinc端片段的原核表达载体并在大肠杆菌中表达。以小鼠肝脏组织总rna为模板,通过rt-pcr扩增小鼠canstatinc端片段(mcan-c)基因,克隆到pmd18-t载体中并进行序列分析。将mcan-c基因定向克隆于原核表达载体pet30a(+)中,构建表达载体pet／mcan-c,转化大肠杆菌bl21(de3),iptg诱导表达。结果表明,小鼠canstatinc端片段的cdna长度为399bp,含有1个终止密码,编码132个氨基酸,与已知的人canstatinc端片段氨基酸的同源性为61％。iptg诱导mcan-c在大肠杆菌e．colibl21中表达,表达量约占菌体总蛋白量的28％,重组蛋白主要以包涵体形式存在。首次克隆了小鼠canstatinc端片段的cdna,iptg诱导mcan-c在大肠杆菌e．colibl21中高效表达。小鼠canstatinc端片段的cdna序列已收入genbank,接受号为:ay502947。