癌基因iaspp的克隆、表达与纯化

iaspp是新近发现的高度保守的p53相关基因,其蛋白产物定位于细胞核内,具有结合nfκbp65亚基和p53功能,进而抑制nfκb的转录调节和p53对凋亡的调节功能。利用rtpcr方法从人白血病细胞系u937中克隆出癌基因iaspp,将其克隆至原核表达载体pet28a(+)中,成功构建iaspp表达载体piaf,重组质粒读码框和序列与预期一致。在iptg诱导下,重组载体大肠杆菌rosetta(de3)菌株,表达产物经sdspage和westernblot方法分析证实系iaspp融合蛋白。利用ni离子鳌合层析的方法纯化iaspp融合蛋白,经sdspage鉴定其纯度超过80%。