人碱性成纤维细胞生长因子突变体的高效表达

用pcr法将人碱性成纤维细胞生长因子(hbfgf)基因中编码第25、69和92位的半胱氨酸(cys)密码子突变为丝氨酸(ser)密码子,将突变的hbfgfcdna片断与表达质粒pet3c连接,构建重组质粒pet3chbfgfser25,69,92。hbfgfser25,69,92在大肠杆菌bl21(de3)中的表达量大于30%。通过阳离子交换和肝素亲和层析两步纯化,得到纯度大于95%的hbfgfser25,69,92。mtt法测定纯化的产物活性表明,hbfgfser25,69,92突变体促balb/c细胞增殖的活性与野生型hbfgf相当,为下一步对hbfgfser25,69,92突变体进行定点化学修饰打下了基础。