重组蓖麻毒素a链蛋白的可溶性表达、纯化与抗原性分析

用pcr方法从克隆质粒puc19-rta中扩增出蓖麻毒素a(rta)链基因,序列分析正确后,亚克隆到原核表达质粒pet-his中,构建重组表达质粒pet-hisrta,再转化到e.colibl21(de3)plyss中获得表达工程菌株bl21/pet-hisrta。该工程菌在30℃经0.4mmol／liptg诱导4h后获得可溶性表达的目的蛋白,约占菌体总蛋白的18.45％,sds-page分析显示表达的蛋白区带与rta相对分子量相符,约32kda左右。表达产物经ni-nta亲和层析法一步纯化,蛋白纯度约达97.53％,并可得到约18mg/l重组rta蛋白。western印迹和间接elisa结果证明,重组rta蛋白与抗天然蓖麻毒素多抗可发生特异性的抗原抗体反应,具有良好的抗原性,这为制备rt特异性抗体及建立rt的检测方法奠定了基础。