牛分枝杆菌mpb64基因的克隆、鉴定及其表达

以牛型分枝杆菌基因组dna为模板,pcr方法扩增mpb64基因,纯化pcr产物并与pdm18-t载体连接、转化,经酶切及核苷酸序列鉴定为正确后,酶切产物亚克隆到原核表达载体pet30a(+)的kpni／ecori位点,构建重组表达质粒pet30a+-mpb64,转化到大肠杆菌de3内,以iptg进行诱导,终浓度为1mmol／l,诱导产物进行sds-page电泳。结果表明,pcr方法成功扩增出mpb64基因,核苷酸序列测定验证了其正确性,重组表达质粒表达的pet30a+-mpb64融合蛋白相对分子量为30.4kda,与实测相符。牛分枝杆菌pet30a+-mpb64的成功表达为牛结核病的诊断及新型疫苗的研究奠定了基础。