多年生黑麦草成熟胚再生体系的建立及基因枪转化

目的:建立以多年生黑麦草成熟胚为起始材料的再生体系,用于基因枪转化。方法:多年生黑麦草成熟种子在附加5mgl2,4d的ms培养基上诱导愈伤组织,转至新继代培养基上产生胚性愈伤组织。分化培养基为无激素ms培养基。再生植株在培养基成分减半的无激素ms培养基生根,之后移栽至土壤。基于这一再生体系,用含有水稻几丁质酶基因rc24的质粒parn6和含有草丁膦乙酰转移酶基因bar的质粒pdb1,通过基因枪轰击胚性愈伤组织。用附加ppt的继代培养基进行转化植株的抗性筛选。结果:共获得243株再生植株。通过pcr进行检测,获得18株整合有rc24基因的植株,15株整合有bar基因的植株,同时转入2个基因的植株2株。