双重套式pcr对不同取样胚胎性别鉴定灵敏度测试

目的:测定双重套式pcr微量扩增体系的灵敏度,为附植前遗传学诊断(pgd)、家畜胚胎性别鉴定等提供技术保障。方法:以桑椹胚卵裂球为模板进行扩增,建立昆明白小鼠特异的sryzfx双重套式pcr性别鉴定体系。按卵裂球数量的不同分为五组,对应的卵裂球个数分别为1、2、3、4、5及以上。根据有效扩增结果得出双重套式pcr的灵敏度。结果:第1组(卵裂球个数为1),有效检出率为85%(34/40),污染率为75%(3/40),漏检率为7.5%(3/40)。随着卵裂球个数的增多,有效检出率逐渐升高,而污染率和漏检率则呈逐渐下降趋势。第5组(卵裂球达到5及以上),有效检出率达到100%,漏检率为0。对于第2、3、4、5组而言,有效检出率及漏检率各组间并无显著差异(p>0.05);而第一组与其它各组间,有效检出率及漏检率存在显著差异(p<0.05)。结论:双重套式pcr可以有效扩增基因组dna量约为12pg的模板,且扩增片段为单拷贝片段。