重组人红细胞生成素二聚体不同真核表达载体的构建及表达

为构建重组人红细胞生成素(recombinanthumanerythropoietin,rhepo)二聚体真核表达载体,应用pcr方法扩增epocdna,pcr产物克隆入t载体后,经酶切、连接、转化等过程分别构建了3个epo二聚体的真核表达载体pbt-1c、pbt-2s及pbt-3c,经测序序列完全正确。然后将3个真核表达载体分别转染于ccs-7细胞及cho-dhfr-细胞中,用elisa方法检测,它们在cos-7的瞬时表达量分别为4iu／ml、11.5iu／ml和7.2iu／ml。其中epo二聚体真核表达载体pbtsv稳定转染cho-dhfr-细胞后,用氨甲喋呤(mtx)逐渐加压的方法筛选到阳性克隆,表达量可达到4000iu／106cells／72h。