nadh依赖型酶活性检测方法的建立

目的:建立一种nadh依赖型酶活性检测的方法。方法:将fdh、leudh串联克隆到表达载体pet-22b(+)中,转化至e.coli,并向培养液中分别添加去离子水、甲酸胺、三甲基丙酮酸,反应一段时间后,检测nadh的吸光度。同时通过测定氨气的产生判断fdh活性;通过薄层层析检测判断leudh活性;比较nadh吸光度测定结果与常规方法结果是否一致。结果:通过测定氨气的产生,证明fdh具有活性;此时nadh吸光度上升亦说明fdh具有活性;两种方法结论一致。薄层层析检测,生成叔亮氨酸,证明leudh具有活性;此时nadh吸光度下降亦说明leudh具有活性;两种方法结论一致。结论:通过检测菌体内部nadh吸光度的变化检测nadh依赖型酶活性的方法可行。