犬瘟热病毒n基因在昆虫杆状病毒表达系统中的表达及应用

目的:为检测犬瘟热抗体提供诊断抗原,应用bac-to-bac杆状病毒表达系统表达犬瘟热病毒(caninedistempervirus,cdv)n蛋白。方法:采用rt-pcr克隆cdv-n基因,构建重组杆粒bacmidcdv-n,并将其转染sf9昆虫细胞。通过westernblot和间接免疫荧光检测n蛋白的表达。以表达的cdvn蛋白为包被抗原,建立了检测犬瘟热抗体的间接elisa方法。结果:成功表达了cdvn蛋白。间接elisa(ielisa)方法中,犬血清最佳稀释度1∶80,n蛋白稀释度1∶40(6.3μg/100μl)。应用该方法共检测了36份犬血清,与中和试验检测方法相比较,其特异性为81.8%,灵敏度为96.0%,符合率为91.7%。结论:表达的cdv-n蛋白具有良好反应原性,建立了快速检测cdv阳性血清的ielisa方法。