mg-132提高tnfr-fc融合蛋白在cho细胞中表达的研究

目的:在不影响细胞活力的前提下,通过抑制人肿瘤坏死因子受体-fc(tnfr-fc)融合蛋白的降解,提高其在中国仓鼠卵巢(cho)细胞中的产量和质量.方法:通过在细胞培养过程中加入全蛋白质合成抑制剂cycloheximide、溶酶体抑制剂leupeptin、蛋白酶体抑制剂mg-132,验证tnfr-fc融合蛋白在cho细胞的降解途径;免疫印迹(westernblot)方法检测在细胞内tnfr-fc融合蛋白的变化,酶联免疫吸附试验(elisa)方法检测分泌表达的tnfr-fc融合蛋白的含量.proteina亲和层析纯化细胞培养液上清,高效液相色谱(hplc)检测重组蛋白的纯度,并通过阻断肿瘤坏死因子α(tnfα)诱导的l929细胞毒作用来检测纯化的tnfr-fc蛋白的活性.结果:tnfr-fc在cho细胞内,经泛素蛋白酶体途径降解,稳定表达tnfr-fc的cho细胞培养过程中添加50μmol/lmg-132,可以使tnfr-fc融合蛋白的分泌表达量提高42.35%,纯化后,二聚体比例提高28.60%,并且纯化后目的蛋白的比活性也增加.结论:在不影响细胞活力、蛋白质生物学活性的前提下,添加蛋白酶体抑制剂mg-132提高tnfr-fc融合蛋白在cho细胞中的表达量,为进一步研究从抑制蛋白质降解途径来提高重组蛋白在cho细胞中的表达量提供了现实依据.