向日葵acc氧化酶基因(haaco1)的克隆及表达分析

目的:克隆向日葵中的acc氧化酶基因(haaco1),并对其进行生物信息学分析及盐胁迫表达分析,为理解向日葵acc氧化酶生理功能并加强对aco基因的利用奠定基础.方法:以前期从盐胁迫的内葵杂4号根中获得的acc氧化酶基因片段4-4-7tdf(km823963)为基础,通过rt-pcr和5'/3'race技术克隆aco基因的全长cdna序列,利用生物信息学软件对获得的cdna序列及编码的蛋白质序列进行分析.同时采用pcr方法克隆基因组dna(genemicdna,gdna)序列,并对其进行结构分析.利用实时荧光定量pcr分析nacl胁迫下向日葵根、下胚轴、叶中haaco1的表达量和不同nacl浓度及不同胁迫时间下根中haaco1的表达量.结果:haaco1的cdna序列全长为1135bp,其开放阅读框为942bp,编码313个氨基酸.预测其分子质量和等电点分别为35.84kda和5.13,基因登录号为kp966508.haaco1与已报道的多种植物的aco基因核苷酸序列及其推导的氨基酸序列有较高的相似性,分别为76%~83%和77%~88%.gdna起始密码子至终止密码子序列长1018bp,包含2个外显子和1个内含子,基因登录号为kp988289.实时荧光定量pcr分析表明向日葵haaco1在不同器官及不同nacl浓度、不同时间诱导下存在特异性表达差异.结论:获得的向日葵haaco1是植物aco家族成员之一,该基因应答盐胁迫具有独特的表达模式.