干扰素α-2bhis89/his159的分子获得及性能分析

目的：通过结构分析和定点突变，构建干扰素α-2bhis89/his159(ifnα-2bhis89/his159)，以期获得高性能干扰素突变体。方法：采用pcr体外定点突变技术，使干扰素α-2b基因的第89位密码子由编码酪氨酸的tac突变为编码组氨酸的cac，第159位密码子由编码谷氨酸的gaa突变为编码组氨酸的cac。将扩增片段克隆入pet23b表达载体，重组质粒转化大肠杆菌bl21(de3)。表达的ifnα-2bhis89/his159经包涵体变性、复性、deae层析和cm层析纯化后，用wish-vsv系统进行生物活性测定。以sd大鼠进行初步药代动力学研究。结果：ifnα-2bhis89/his159主要以包涵体形式表达，表达量占菌体总蛋白的40%以上。纯化后，ifnα-2bhis89/his159的纯度大于95%，比活性大于2.8×108iu/mg。相对于ifnα-2b较短的消除半衰期，ifnα-2bhis89/his159的消除半衰期得到延长，为2.34±0.27h。结论：构建了ifnα-2bhis89/his159的重组表达载体，并成功地在大肠杆菌中实现了高效表达，建立了ifnα-2bhis89/his159的纯化工艺，获得了体外活性增高并且体内稳定性得到改善的新型干扰素α-2b突变体。