帕金森病相关蛋白pink1和α-突触核蛋白相互作用研究

目的利用蛋白质组学方法和激光扫描共聚焦显微镜来鉴定帕金森病相关蛋白pink1和α-突触核蛋白（α-synuclein）之间的相互作用关系及两种蛋白在mn9d细胞中的分布。方法将α-synuclein基因插入pgex-4t-1载体，经dna测序证明形成gst融合蛋白，经大肠杆菌bl-2l表达纯化后，与mn9d细胞裂解液共孵育，检测pink1与α-synuclein蛋白间的相互作用。并应用mn9d细胞的内源性pink1与α-synuclein进行免疫共沉淀实验，进一步验证两蛋白之间的相互作用。mn9d细胞经免疫细胞化学染色，利用激光扫描共聚焦显微镜观察两种蛋白的细胞内分布及共定位状态。结果利用gst-α-synuclein融合蛋白捕获及免疫共沉淀技术，检测到特异的pink1条带。激光扫描共聚焦显微镜检测到两者存在部分共定位。结论pink1和α-synuclein在体外和细胞内均可发生相互作用并在mn9d细胞中存在共定位关系。